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你还在纠结是做MTT还是CCK8?

日期:2022-04-22浏览:255次

细胞增殖及毒性检测是生物相容性测试的一种,检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况,即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响,来评价药物或材料的毒性或者活性,主要用于药物活性筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、抗肿瘤药效测定等;常用MTT法或者CCK-8法检测,另外也可以通过Live/dead双染法进行细胞成像,更直观的记录细胞的存活情况。


细胞增殖检测实验的意义:

细胞增殖是细胞在周期调控的因子下,通过DNA复制等反应,完成细胞分裂的过程。增殖检测一般用于分析分裂中的细胞数量的变化,进而反应细胞的生长状态及活性,目前广泛应用于肿瘤生物学,分子生物学,药代动力学等领域。


MTT法

在活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臢化合物,用二甲基亚砜(DMSO)将其溶解成溶液,用酶标仪测定其浓度(OD490或者570),从而定量测定细胞的存活比例,细胞增殖越多越快,对应的吸光度越高;细胞毒性越大,对应的吸光度越低。

CCK-8法 

CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8 —— 一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以为线粒体内的脱氢酶验明正身。在脱氢酶作用下,WST-8被还原生成橙黄色的甲瓒产物,用酶联免疫检测仪在OD 450nm波长处测定其光吸收值。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。


CCK8与MTT法的主要区别如下:

一、原理不同

1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 试剂盒最先是由日本同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。

2、MTT法:其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

二、特点不同

1、Cell Counting Kit-8:灵敏度高,数据可靠,重现性好;操作简便,省时省力;水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞;无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;适合于高通量药物筛选。

2、MTT法:特点是灵敏度高、经济。

目前市面上能提供的CCK-8试剂盒有国产,进口分装以及进口原装之分,国产的CCK-8试剂盒在质量稳定性不亚于进口原装,同样具有较好的检测结果,同时价格方面低于进口原装,具有高的性价比。



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