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CCK8法测定细胞增殖注意事项

日期:2021-07-29浏览:524次

    CCK8全称Cell Counting Kit-8,是一种基于WST-8(化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理类似于MTT,在电子耦合试剂存在的情况下,WST-8可以被线粒体内的脱氧酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的数量有关。CCK8法在药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性实验、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等方面应用广泛。

注意事项:
    1、接种细胞应选对数生长期细胞进行,同时需要选择合适的细胞浓度。
    2、检测的时,试剂加入的时候沿着孔壁加入,不要产生气泡,否则会干扰读数。
    3、检测OD值范围在0.1-2之间,较为理想的OD值范围为1-2。
    4、酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰,可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
    5、为了个人安全,建议穿戴实验服和一次性实验手套操作。

心得体会:
    1、同MTT实验一样,96孔板的边缘效应,边孔的水分蒸发很快,培养液及里面的药物会出现浓缩现象,这样会导致数据的误差较大,因此在实验设置的时候,一般将边孔留出为空白孔,在孔中加入液体,以使中间孔的水分饱和。
    2、悬浮细胞由于染色困难,一般需要增加细胞数量和延长CCK8孵育时间。
    3、CCK8试剂保存时间,0-5℃下保存6个月,-20℃下避光保存1年。
    4、金属对实验结果有影响,实验中应想法将其去除。
    

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