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2021-07-29
研究人员发现，尽管大脑通过中脑产生5-羟色胺的神经元来调节快感和饥饿感的进食，但每种进食方式都是由自己独立的电路连接的，不影响其他类型的进食方式。美国疾病控制与预防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的数据显示，无论是由饥饿还是愉悦引起的暴饮暴食，通常都会导致肥胖。美国约42%的成年人都患有肥胖症。一个由贝勒医学院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人员领导的国际研究小组在动物模型上研究了大脑是如何调节饥饿或其...2021-07-29
基本原理：外源目的DNA与载体分子的连接称为DNA重组，重组的DNA称为重组体或重组子。研究中需要克隆或表达的基因为外源DNA，载体是指能够携带外源基因进入受体细胞，并在其中进行扩增或诱导外源基因表达的工具，其中质粒载体最为常用。质粒是独立于细菌染色体外具有自我复制的DNA分子。所有的质粒都有复制子、选择性标志和多克隆位点3个共同的特性。质粒载体的选择包括载体的大小、载体拷贝数、多接头以及筛选插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比较常用的真核表达载体。基本步骤：1、目...2021-07-29
CCK8全称CellCountingKit-8，是一种基于WST-8（化学名为2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐）的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理类似于MTT，在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氧酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的数量有关。CCK8法在药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性实验、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检...2021-07-27
41、跑电泳的时候配的胶总是“缩”是什么原因呢？是有的成分不对吗？答：没什么问题，就是你胶里的水分被蒸发了。过夜时拿保鲜膜包起来，在里面加点水保持湿度就可以了；也可能母液（30%聚丙酰胺）有问题，你可以重新配制一份观察；能够替换的试剂，尽量换一下，选用好的试剂。42、蛋白质的分子量跨度很大，如要分离小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好吗？答：这么广的分布不好转移，一般建议：21kd和66kd可以一起转，12％SDS-PAGE，湿转120mA，45-60min...2021-07-27
Westernblot实验过程中常见问题汇总及处理方案。21、想分离的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适？浓缩胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作WesternBlot吗？答：分离胶用7％，浓缩胶3.5％，200kd的蛋白不好做。22、如果上样量超载，要用什么方法来增加上样量？答：可以浓缩样品，也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超载30％是不会有问题的。如果已经超了不少了，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，...2021-07-27
Westernblot实验过程中常见问题汇总及处理方案。1、westernblot的优点及缺点答：优点：灵敏，特异性高，常规可达ng级，Ecl显色法理论上可达pg级。缺点：通量有限。2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？答：原因有很多：首先排除WB过程是不是抗体的问题，重新实验、更换抗体；其次排除蛋白是否降解，提取的时候需要加入蛋白酶抑制剂，a)你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；最后考虑此种细胞是否表达该蛋白，表达量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？答...